ELISA-dataanalys: Linjär standardkurva i GraphPad Prism

ELISA-dataanalys: Linjär standardkurva i GraphPad Prism

Innehållsförteckning

• Introduktion
• Steg 1: Skapa 96-brunnarsplattform för Elisa-experiment
• Steg 2: Mät absorbansen av standardkurvor och okända prover
• Steg 3: Korrigerad absorbans för prover
• Steg 4: Anpassa standardkurva och beräkna koncentration
• Steg 5: Skapa en partiell diagram
• Steg 6: Statistisk analys med T-test
• Sammanfattning
• Vanliga frågor och svar (FAQ)

Introduktion

I den här videoklippet kommer jag att steg för steg förklara hur man analyserar data från en Elisa-analys och konstruerar en linjär standardkurva i GraphPad Prism. Jag kommer också att visa hur man beräknar koncentrationen av okända proteiner och skapar ett partiellt diagram för att visa resultaten.

Steg 1: Skapa 96-brunnarsplattform för Elisa-experiment

För att genomföra Elisa-experimentet behöver vi först skapa en 96-brunnarsplattform med hjälp av en pinne och Elisa-avläsare. I plattformen placerar vi standardkurvprov i dubletter i de två första kolumnerna och sedan seriellt spädda prov i resten av brunnarna. Vi markerar också controllprov och sjukdomsprov med olika färger för att kunna skilja dem åt.

Steg 2: Mät absorbansen av standardkurvor och okända prover

Absorbansen hos varje prov mäts vid 450 nanometer med hjälp av Elisa-avläsaren. Resultaten registreras i en Excel-fil, där vi kan se de råa absorbansvärdena för varje prov.

Steg 3: Korrigerad absorbans för prover

För att analysera data korrekt behöver vi korrigera absorbansvärdet för varje prov genom att subtrahera absorbansen hos plankkontrollen. Detta ger oss den korrigerade absorbansen för varje prov, antingen det är ett standardprov eller ett okänt prov. Genom att använda formler i Excel kan vi automatiskt beräkna de korrigerade absorbansvärdena för varje prov.

Steg 4: Anpassa standardkurva och beräkna koncentration

För att bestämma koncentrationen av de okända proverna behöver vi skapa en linjär standardkurva med hjälp av GraphPad Prism. Genom att använda interpolering kan vi ange koncentrationen för varje prov baserat på absorbansen. Prism genererar också en best-fit-linje för standardproverna och beräknar R^2-värdet för att visa hur väl linjen passar till datan.

Steg 5: Skapa en partiell diagram

För att visualisera skillnaderna mellan sjukdoms- och kontrollproverna kan vi skapa ett partiellt diagram i GraphPad Prism. Genom att kopiera koncentrationsvärdena för både kontroll- och sjukdomsproverna till en ny datasida i Prism kan vi sedan skapa ett partiellt diagram som visar nivån av protein X för varje grupp.

Steg 6: Statistisk analys med T-test

För att bekräfta om skillnaderna mellan sjukdoms- och kontrollproverna är statistiskt signifikanta kan vi använda T-test i GraphPad Prism. Genom att ange vilken typ av T-test vi vill utföra och välja det tvåsidiga alternativet kan vi få fram en p-värde som visar om skillnaderna är signifikanta eller inte.

Sammanfattning

Att analysera data från Elisa-experiment kan vara komplicerat, men med hjälp av Excel och GraphPad Prism blir processen enklare. Genom att följa dessa steg kan vi få en djupare förståelse för protein X-nivåerna i sjukdoms- och kontrollproverna.

Vanliga frågor och svar (FAQ)

Q: Hur skapar jag en linjär standardkurva i GraphPad Prism? A: Du kan skapa en linjär standardkurva genom att markera dina standardkurvprov, klicka på "Interpolate Standard Curve" -ikonen och välja "Linear" som anpassningsmetod.

Q: Vad betyder R^2-värdet i standardkurvan? A: R^2-värdet är ett mått på hur nära den linjära standardkurvan passar till dina data. Ett R^2-värde på 0,99 betyder att kurvan passar mycket bra till dina data.

Q: Vad innebär det om det är en signifikant skillnad mellan sjukdoms- och kontrollproverna? A: En signifikant skillnad innebär att skillnaderna mellan sjukdoms- och kontrollgrupperna är större än vad man kan förvänta sig på grund av slumpmässiga variationer. Detta kan tyda på en verklig skillnad mellan grupperna.